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ibidi可移除腔室載玻片的一片高效多功能應(yīng)用

更新時(shí)間:2023-06-14   更新時(shí)間:2023-06-14   點(diǎn)擊次數(shù):1056次

  Ibidi 3孔/8孔/12孔可移除腔室載玻片為實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)MCF-7細(xì)胞提供了一種簡單且高效的實(shí)驗(yàn)方案~

  

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  實(shí)驗(yàn)方案:

  

  細(xì)胞培養(yǎng),固定,染色和成像觀察--都是在一個(gè)開放型小室中搞定:


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  實(shí)驗(yàn)步驟1:

  

  必須在預(yù)實(shí)驗(yàn)中確定細(xì)胞系的正確接種濃度。根據(jù)您的細(xì)胞類型,用4-6x104細(xì)胞/ ml在2-3天內(nèi)產(chǎn)生匯合的單層。

  

  1.在無菌條件下,打開8孔可移除腔室載玻片(ibidi,80841)包裝。

  

  2.像往常一樣用胰蛋白酶消化并計(jì)數(shù)細(xì)胞。細(xì)胞濃度為5×104細(xì)胞/ ml MCF-7。

  

  3. 將400微升細(xì)胞懸浮液加入腔室的每個(gè)孔中。避免搖晃,因?yàn)檫@會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞分布不均勻。

  

  4. 用配套的蓋子蓋住。在37°C和5%CO2下培養(yǎng)。細(xì)胞至少培養(yǎng)24小時(shí),或直到建立融合的單層。

  

  實(shí)驗(yàn)步驟2:

  

  固定是染色程序的第一步。目標(biāo)是將細(xì)胞,細(xì)胞形成物或組織維持在其當(dāng)前狀態(tài),并在較長時(shí)間內(nèi)通過化學(xué)試劑保存。

  

  1.小心地吸出細(xì)胞培養(yǎng)基。

  

  2.用PBS洗兩次。

  

  3.加入400μl福爾馬林溶液。

  

  4.在室溫下孵育30分鐘。

  

  5.小心吸入福爾馬林溶液。

  

  6.用PBS洗滌三次。

  

  實(shí)驗(yàn)步驟3:

  

  應(yīng)根據(jù)感興趣的細(xì)胞結(jié)構(gòu)選擇染色試劑。在該方案中使用DAPI和DYE-490鬼筆環(huán)肽染色MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞核和肌動(dòng)蛋白骨架。

  

  1.準(zhǔn)備你的染色溶液:PBS、DYE-490鬼筆環(huán)肽、DAPI 1μg/ml

  

  2.小心吸出PBS。

  

  3.移取400μl染色溶液到每個(gè)孔中

  

  4.在室溫下避光孵育30分鐘

  

  實(shí)驗(yàn)步驟4:

  

  染色后清洗樣本可最大限度地減少背景信號

  

  1.小心地吸出染色溶液

  

  2.加入400μl緩沖液

  

  3.小心地吸出緩沖液

  

  4.重復(fù)步驟2和步驟3至少一次

  

  實(shí)驗(yàn)步驟5:

  

  從一個(gè)邊緣開始,用手或用鑷子小心地取下硅膠墊圈。該步驟應(yīng)以緩慢,穩(wěn)定的進(jìn)行,以避免損壞細(xì)胞層?! ?/span>

  

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  實(shí)驗(yàn)步驟6:

  

  完成染色程序后,必須在用顯微鏡成像之前封固樣品。該步驟還可防止樣品脫水。

  

  1.將載玻片側(cè)面在干凈的實(shí)驗(yàn)室濕巾上輕敲,去除樣品中多余的介質(zhì)。

  

  2.將封固劑涂在樣品上。用24 x 60毫米的蓋玻片覆蓋安裝好的樣品,小心地將蓋玻片放到安裝介質(zhì)上,以避免夾住任何氣泡。Tip:建議使用硬化封片劑,如FluoroshieldTM (Sigma-Aldrich), Vectashield? (Vector Laboratories Inc.), or ProLong Antifade? (ThermoFisher Scientific)。

  

  3.等封片劑固定好?! ?/span>

  

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  實(shí)驗(yàn)步驟7:顯微觀察  

  

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  在可移除8孔腔室載玻片中免疫染色的MCF-7細(xì)胞的熒光顯微鏡檢查。綠色:α-微管蛋白,紅色:F-肌動(dòng)蛋白(鬼筆環(huán)肽),藍(lán)色:細(xì)胞核 (DAPI)。使用20倍物鏡拍攝寬場熒光圖像。


  ibidi提供了一種簡單且經(jīng)濟(jì)高效的方案,使用一片可移除的腔室載玻片可進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng),固定和染色,無需爬片,是倒置/正置顯微鏡以及長期樣品儲(chǔ)存的理想選擇。


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